Hibridização in situ

o hibridização in situ é um método para detectar aberrações cromossômicas. Certos cromossomos são marcados com corantes fluorescentes e ligados a uma sonda de DNA. Esta técnica é usada para o diagnóstico pré-natal de mutações genéticas.

O que é hibridização in situ?

Com hibridização in situ ou o Hibridização in situ fluorescente ácidos nucléicos de RNA ou DNA são detectados em certos tecidos ou uma célula usando métodos de genética molecular. Normalmente, esse tipo de diagnóstico é usado para detectar uma anormalidade cromossômica numérica ou estrutural durante a gravidez.

Para isso, é utilizada uma sonda fabricada artificialmente, que por sua vez consiste em ácido nucléico. Em seguida, ele se liga aos ácidos nucléicos do organismo por meio do emparelhamento de bases. Esta ligação é designada pelo termo hibridização. As evidências são baseadas na estrutura viva do paciente e, portanto, correspondem às evidências in situ. Isso deve ser diferenciado dos métodos in vitro nos quais a detecção ocorre no tubo de ensaio. O método foi desenvolvido no século 20 pelos cientistas Joe Gall e Mary Lou Pardue.

A tecnologia evoluiu desde então. Enquanto sondas radioativas eram usadas naquela época, por exemplo, sondas marcadas com fluorescência com uma ligação covalente às moléculas marcadoras são usadas hoje.

Função, efeito e objetivos

A hibridização in situ é geralmente usada para detectar aberrações cromossômicas, ou seja, anomalias cromossômicas que não podem ser detectadas em um cariograma. Isso significa que o método é sempre usado quando doenças hereditárias são detectadas durante a gravidez.

Como as aberrações cromossômicas são um problema que não deve ser subestimado hoje, o uso do método tem aumentado ao longo do tempo. A hibridização ocorre com base nas células nativas do líquido amniótico da mãe. A base da tecnologia é a ligação da sonda marcada com cores às partes do DNA. Graças à encadernação, o número de cópias pode ser avaliado posteriormente ao microscópio, uma vez que as cópias individuais emitem um sinal luminoso e podem assim ser visíveis ao microscópio. Existem diferentes procedimentos. A análise ocorre imediatamente após a ligação.

Nesse caso, é usado um corante fluorescente, como a biotina, que se liga diretamente à sonda de DNA. Com o método indireto de hibridização in situ, a avaliação não pode ocorrer imediatamente após a hibridização, pois as substâncias fluorescentes só podem se ligar à sonda após a hibridização. Este método indireto é usado com mais frequência do que o direto porque se acredita ser mais sensível. Além das sondas de DNA de centrômetro específicas do cromossomo, há também sondas de DNA específicas do locus, sondas de biblioteca de DNA específicas do cromossomo e hibridizações comparativas do genoma.

Sondas de DNA de centrômetro específicas para cromossomos podem ser usadas para detectar anomalias numéricas cromossômicas. Isso significa que eles são usados ​​principalmente quando há suspeita de cromossomos duplicados ou excluídos. As sondas de DNA específicas de localização são particularmente adequadas para a detecção de mutações mínimas que não podem ser detectadas no cariograma. Uma sonda de biblioteca de DNA específica para cromossomos é usada em particular para detectar inserções e translocações.

A hibridização comparativa do genoma, por outro lado, é uma análise abrangente das perdas e ganhos no material cromossômico. Hoje, a hibridização in situ é muito importante no diagnóstico de várias mutações cromossômicas.No diagnóstico da síndrome de Down, as sondas ligam-se, por exemplo, ao cromossomo 21. Para tanto, costumam ser utilizadas sondas específicas para o cromossomo, que podem ser utilizadas caso haja suspeita dessa doença.

Pode-se suspeitar, por exemplo, se os pais já deram à luz uma criança com a doença e a imagem do ultrassom é anormal. Se houver uma ligação tripla em vez de uma ligação dupla e, portanto, um sinal de cor tripla for emitido, o diagnóstico é considerado confirmado.

Riscos, efeitos colaterais e perigos

Em contraste com a PCR, por exemplo, a hibridização in situ é significativamente menos suscetível à contaminação. Além disso, o tempo necessário para o processo é consideravelmente menor. No entanto, como os embriões em particular formam padrões cromossômicos, o restante da distribuição cromossômica e, portanto, o status genético de outras células não pode ser inferido de um determinado padrão.

Os sinais de cor também podem se sobrepor ou permanecer invisíveis por outros motivos. Como resultado, a hibridização in situ como ferramenta diagnóstica é relativamente sujeita a erros durante a gravidez. Podem surgir diagnósticos errados e os pais podem decidir contra um embrião saudável. Para reduzir a suscetibilidade a erros de hibridização in situ, pelo menos duas células embrionárias devem ser examinadas simultaneamente. Ao examinar duas células em paralelo, agora há apenas um risco insignificante de diagnóstico incorreto.

Nesse caso, os pais podem confiar totalmente no diagnóstico. A hibridização in situ não é oferecida a todas as mulheres grávidas, mas apenas a mulheres de um grupo de risco. No entanto, não é negado a mulheres grávidas esse tipo de diagnóstico a seu próprio pedido. Achados de ultrassom anormais ou um soro anormal podem induzir um médico a oferecer o procedimento diagnóstico. Embora uma grande parte, mas não todas, das aberrações cromossômicas possam ser diagnosticadas usando a hibridização in situ.

Portanto, a hibridização in situ nunca deve ser realizada sozinha, mas deve sempre ser usada em conjunto com um teste cromossômico convencional. O cuidado à gestante desempenha um papel fundamental neste procedimento. Antes da análise, há uma discussão aprofundada com a gestante sobre o método diagnóstico, que explica os riscos, as possibilidades e os limites da tecnologia.